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如何将DNA各模板浓度调至均一?我的实验必须要求DNA模板浓度一致,做一板PCR就是96个样,以10ul的体系来说,模板一般式加10ng,一板PCR也就有96个不同的DNA模板,如何保持这96个DNA模板的浓度一致呢,
更新时间:2024-03-29 03:36:13
3人问答
问题描述:

如何将DNA各模板浓度调至均一?

我的实验必须要求DNA模板浓度一致,做一板PCR就是96个样,以10ul的体系来说,模板一般式加10ng,一板PCR也就有96个不同的DNA模板,如何保持这96个DNA模板的浓度一致呢,我们测定DNA的浓度一般是使用ND-2000这种仪器,求指导的网友告诉我,感激不尽呐,我财富值不多,可以全部给你们

黄智伟回答:
  如果要求不是特别苛刻的话,可以用分光光度计测定OD值.因为DNA的浓度与260nm处的吸光度成正比,所以只要测定了初始溶液的OD值,按比例加入即可.
梁霄回答:
  方法我是知道的,用分光光度计法或者直接用ND-2000来测定都可以,关键是一次的样品就很多,比如96个样品,其测出来的浓度差异很大,比如1383ng/ul,987/ul.诸如此类的,而我做PCR只需要30ng/ul,最后稀释后所加的模板量误差会很大
黄智伟回答:
  你可以用微量核酸蛋白分析仪测定,可以放96孔板,每次测96个样,也可以放96×4=384孔板,一次测384个样。如果你用普通的紫外分光光度计,那每次只能测几个甚至一个样,就比较麻烦了。微量核酸蛋白分析仪可以根据吸光度自动计算出你的样品浓度,而且误差很小,用起来非常方便。只有你知道了每个模板的浓度,适当稀释就可以了。
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